[图文]用高效液相色谱法测定对羟基苯甲酸酯类含量

    摘  要本文介绍了用反相高效液相色谱—紫外检测器进行色谱分析，采用外标法定量，测定饮料、酱油、食醋、辣酱等食品中对羟基苯甲酸酯类含量，该测定方法具有可操作性、广泛的应用性和较高的准确性。
    关键词 高效液相色谱法 对羟基苯甲酸酯类 外标法

   对羟基苯甲酸酯即尼泊金酯，主要品种有对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯，是新一代消毒杀菌防腐剂，它具有低毒、高效、用量少等优点，被广泛地应用于饮料、酱油、食醋、化妆品和医药等方面。目前，测定对羟基苯甲酸酯类含量的方法是依据GB/T5009.31-2003制定的。该方法较为繁琐、费时，且样品处理不当，对羟基苯甲酸酯就不能被完全提取，影响检测结果的准确性。另外，该方法采用气相色谱法，仪器条件较难掌握，尤其在无自动进样器的条件下，因此同样影响检测结果的准确性。笔者用反相高效液相色谱—紫外检测器进行色谱分析，采用外标法定量，测定饮料、酱油、食醋、辣酱等食品中对羟基苯甲酸酯，方法回收率范围为97.4%～101.3％，结果令人满意。在2006年长三角地区农产品食品检验能力比对试验活动中，采用该方法检测对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯，获得满意结论。

    1.实验部分

    1.1 方法

     试样中对羟基苯甲酸酯用乙醇提取，经过离心，取上清液用0.45μm滤膜过滤供液相色谱仪测定，外标法定量。

    1.2 试剂与标准品

    1.2.1 无水乙醇  优级纯

    1.2.2 乙醇溶液 50%

    1.2.3 甲醇  HPLC

    1.2.4 盐酸溶液 1：1

    1 2.5 标准物质：对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯；纯度≥99.0%

    1.2.6标准储备液：分别称取对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯100mg,用无水乙醇溶解定容至100ml，此溶液浓度为1mg/ml。

    1.2.7标准工作溶液：分别吸取上述贮备液10mL，用50%乙醇溶液定容至100mL，此溶液浓度为100μg/mL。再分别吸取0、5、10、15、20mL，用50%乙醇溶液定容至100mL，标准工作溶液浓度分别为0、5、10、15、20μg/mL。

    1.3  仪器与设备

    1.3.1  Agilent1100高效液相色谱仪（配有紫外检测器）

    1.3.2  分析天平，精度为0.1mg

    1.3.3  离心机

    1.3.4  超声波水浴锅

    1.3.5  0.45μm有机相针式过滤头

    1.3.6  100mL容量瓶

    1.4  样品处理

    称取均匀的样品5至15克（准确至0.01g）于100mL容量瓶中，加1mL1：1盐酸溶液混合，再加入50mL50%乙醇溶液，在超声波水浴中超声提取20分钟，用50%乙醇溶液定容至刻度,摇匀。用一次性注射器抽取一定体积的样品，用0.45μm有机相针式过滤头过滤，滤液供测定用。如样品为明显浑浊液体，可用离心机沉淀后，再过滤测定。

    1.5 仪器条件

    1.5.1 检测器：紫外检测器， 260nm波长检测

    1.5.2 色谱柱：phenomenex Luna 5μm C18(2) 250mm×4.6mm

    1.5.3 流动相：A：甲醇；B：0.02mol/L乙酸铵

    1.5.4 流动相梯度，见下表

    1.5.5 流速：1.0mL/min

    1.5.6 进样量：20μL

    1.5.7 柱温：25℃

    2.结果计算

    根据保留时间定性，外标峰面积法定量。对羟基苯甲酸酯含量按式（1）计算：

    R=C×V／m……………………（1）

    R—样品中对羟基苯甲酸酯含量（mg/kg）；

    C—试液中对羟基苯甲酸酯的浓度（μg/mL）；

    V—试液定容体积（mL）；

    m—试样质量（g）。

    3.结果与讨论

    3.1 对羟基苯甲酸酯浓度与其峰面积线性的相关性

   用1.2.7标准工作系列溶液，按1.5分析条件进行测定，每个标准点分别进样三次取平均值。以对羟基苯甲酸酯浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，得对羟基苯甲酸乙酯回归方程为y=0.00896x-0.422，其相关系数为0.9998对羟基苯甲酸丙酯回归方程为y=0.00975x-0.395，其相关系数为0.9998。

    3.2分析方法的准确度（回收率试验）

   称取10份未添加对羟基苯甲酸酯的饮料样品约10克，加入不同体积的100μg/mL对羟基苯甲酸乙酯和对羟基苯甲酸丙酯乙醇标准混合溶液，定容至100mL，用1.5分析条件做回收率测定，实验数据见下表。

    回收率试验结果

    3.3 分析方法的精密度

   取含有对羟基苯甲酸乙酯和对羟基苯甲酸丙酯的饮料样品10克（准确至0.01g）10份，按1.4方法进行处理，按1.5分析条件测定，平均值分别为132mg/kg、80.9mg/kg，得到对羟基苯甲酸乙酯标准偏差（σ）为0.711，变异系数（RSD）为0.00539；对羟基苯甲酸丙酯标准偏差（σ）为0.489，变异系数（RSD）为0.00604。

    3.4 实验室之间的比对结果

   2006年底,在参加长三角地区农产品食品检验能力比对试验活动中,笔者用此方法进行对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯项目比对，比对结论为满意。