对蜂蜜中四环素族抗生素残留量测定的看法

   摘  要  现行国家标准GB/T5009.95-2003是采用微生物管蝶法测定蜂蜜中四环素族抗生素残留量的。本文对该方法中给出的抗生素标准稀释液浓度偏低，无法满足测定要求等问题进行了探讨。

   关键词  蜂蜜  抗生素残留量  测定

   GB/T5009.95-2003《蜂蜜中四环素族抗生素残留量的测定方法》由卫生部和国家标准化管理委员会2003年8月11日发布，2004年1月1日实施的。标准规定用微生物管蝶法测定蜂蜜中四环素族抗生素残留量。然而，笔者在实际检测过程中发现该方法存在一定问题。

   蜂蜜中四环素族抗生素经缓冲液提取，用SEP-PAKC18柱纯化，利用生物法分离和定性，用微生物管蝶法定量进行测定。微生物法是根据对抗生素敏感的实验菌，在适当条件下所产生的抑菌圈大小和药物浓度成比例的关系设计而成。

   该法中使用的抗生素标准稀释液，即四环素、土霉素标准曲线的标准浓度（c）为0.16、0.21、0.26、0.32、0.40、0.50μg/mL，参考浓度为0.25μg/mL；金霉素标准曲线的标准浓度（c）为0.033、0.041、0.051、0.064、0.080、0.100μg/mL，参考浓度为0.050μg/mL。按照这种标准溶液的浓度，配置标准稀释液进行定量试验——制备标准曲线及检测样品。

   通过反复试验，笔者发现，在制备标准曲线时，将此浓度的稀释液置于制备好的检定用平板上，于37℃±1℃培养16h后，菌层生长过程中没有产生抑菌圈。把抗生素标准稀释液的浓度扩大10倍，再多次进行试验，其结果同原浓度试验结果一样，没有产生抑菌圈。继续把抗生素标准稀释液的浓度扩大到百倍，即配制四环素、土霉素标准曲线的标准浓度（c）为16.0、21.0、26.0、32.0、40.0、50.0μg/mL，参考浓度为25.0μg/mL；金霉素标准曲线的标准浓度（c）为3.30、4.10、5.10、6.40、8.00、10.00μg/mL，参考浓度为5.00μg/mL。反复试验结果发现，以此浓度的标准稀释液进行定量试验制备标准曲线时，菌层生长过程中产生了抑菌圈，以标准浓度c为纵坐标，以相应的F（9个标准浓度的抑菌圈直径的平均值与9个参考浓度的抑菌圈直径的平均值的差值）值为横坐标，绘制出抗生素标准曲线，并根据被检样液与参考浓度抑菌圈直径平均值的差值Ft（同F：9个数值的平均值），由该曲线上查出样液中抗生素的浓度，带入计算公式，得出样液中四环素族抗生素残留量。

   试验中，笔者还发现菌层生长过程中产生的抑菌圈很不规则，不完全是圆形，或为大致椭圆形，或为缺棱角多边形，菌圈边缘不太清晰、不整齐，这种情况下人为量取抑菌圈直径的误差较大，绘制出的浓度曲线不准确，由曲线查出的样液浓度更不准确，由此导致最终得出的样液测定结果不准确。

   GB/T5009.95-2003方法中既有定量试验又有定性试验。笔者认为，该方法较适合用于定性试验，而GB/T18932.4-2002《蜂蜜中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定方法液相色谱法》的检出限为：0.010mg/kg(土霉素、四环素、金霉素、强力霉素)。针对国家标准蜂蜜中四环素族抗生素残留量≤0.05mg/kg的指标要求，液相色谱仪的这种微量检测科学准确、可靠实用，能够较准确地反映蜂蜜中四环素族抗生素的残留量。

    （作者单位：新疆伊犁哈萨克自治州产品质量检验所）