[图文]高效液相-紫外法检测蜂蜜中磺胺类的药物残留

    摘  要 磺胺类药物属抗生素类药物，按GB/T18932.5-2002《蜂蜜中磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲基异恶唑、磺胺二甲氧嘧啶残留量的测定方法　液相色谱法》方法检测，需将样品进行荧光化处理，比较烦琐、费时，另外还需配有荧光检测器，又由于其价格比较昂贵，一般企业还很难实现。根据目前检测现状，笔者利用较为常见的紫外检测器通过优化条件，摸索出一个简捷、快速、经济，又能保证一定精度的测定方法。
    关键词  高效液相 紫外法 磺胺类 药物残留

   磺胺药（Sulfonamides）为比较常用的一类药物，其抗菌谱广、吸收较迅速，有的（如磺胺嘧啶，SD）还能通过血脑屏障渗入脑脊液，并且较为稳定，不易变质。因此，常用来治病、防病。蜜蜂在饲养中也常用磺胺等药物进行预防疾病。

   磺胺类药物主要经肝脏代谢灭活，形成乙酰化代谢物后经尿排出。由于上述化合物一旦溶解度降低，易在尿液中析出，从而伤及尿路，所以，可能导致血尿、结晶尿及肾脏损害。笔者利用较为常见的紫外检测器通过优化条件，摸索出一个简捷、快速、经济，又能保证一定精度的测定方法。本方法加标回收率在88.00%～111.17%之间，线性系数R>0.9998，检出限磺胺噻唑为0.05μg/ml；磺胺二甲氧嘧啶为0.10μg/ml，分析时间不到20分钟，完全能够满足分析要求，具有广泛的应用前景。

    1.实验部分

    1.1仪器与设备

    Waters Allance2695高效液相色谱仪、PDA2996检测器+自动进样器、柱温箱、Empower色谱工作站、分析天平、高速离心机、超声波水浴锅、抽滤瓶、过滤头、过滤膜等。

    1.2试剂、耗材与标准品

   试剂与耗材：甲醇、乙腈、庚烷磺酸钠为色谱纯；磷酸、盐酸、乙酸钠、磷酸二氢钾和磷酸氢二钾、乙酸铵为优级纯；丙酮为分析纯；荧光胺为化学纯；苯磺酸型500mg，3ml阳离子交换柱和OasisHLB萃取小柱；超纯水。

    标准品：磺胺噻唑和磺胺二甲氧基嘧啶，购于百灵威化学品部（进口）。

    1.3标准溶液

   准确称取上述标准物质适量(精确到±0.0001g)，用甲醇溶解配成0.1mg/ml的标准储备液。根据需要用流动相或0.1mol/L盐酸溶液稀释成混合标准工作溶液0.001mg/ml、0.01mg/ml、0.02mg/ml、0.05mg/ml。

    1.3实验方法

    色谱条件：

    色谱柱：SunFire-c18  4.6×150mm×5μm粒径

    检测波长：254nm

    柱温：28℃±5℃    流速：1.0ml/min      进样量：10μL

    流动相：流动相配比如下（表1）：

    A----乙腈；

   B----0.01mol/L乙酸铵(称取0.77g优级纯乙酸铵，用超纯水稀释至1000ml,经0.45μm微孔滤膜过滤，备用）溶液。

    定量方法 ： 取10μL进样，根据保留时间定性，以峰面积计算，以外标法定量。

表1流动相配比表
时间(min)    流量(mL/min)    A%     B%
      /     1.00     15     85
    10    1.00     60     40
    12    1.00     15     85
    17    1.00     15     85

    1.3.1样品制备及分析步骤

    试样制备[2]：对无结晶的样品，将其搅拌均匀。对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过60℃的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅拌均匀，迅速冷却至室温。分出0.5kg作为试样。制备好的试样置于样品瓶中，密封，并做好标记，于常温下保存。

    样品处理：称取5.00g试样，置于150 ml锥形瓶中，加入25ml磷酸溶液（1000ml水中加入1ml优级纯磷酸）于液体混匀器上快速混匀1min，使试样完全溶解。溶解后的样品进行净化、浓缩、挥干、溶解、过滤、离心备用。

    1.3.2工作曲线：每种标准工作溶液0.001mg/ml、0.01mg/ml、0.02mg/ml、0.05mg/ml各进样10μL。根据保留时间定性，以峰面积计算，以外标法定量，绘制工作曲线，线性方程为：Y=3.12e+007x-8.09e+003(磺胺噻唑)，线性R:0.999993；Y=7.81e+006x-2.88e+003(磺胺二甲氧嘧啶)，线性R:0.999878。标准样品图如下（图1、图2、图3）：

图1

图2

图3

    图1：磺胺噻唑及磺胺二甲氧基嘧啶重复性比较谱图

    图2：磺胺噻唑及磺胺二甲氧基嘧啶检出限谱图

    图3：磺胺噻唑及磺胺二甲氧基嘧啶浓度为0.001mg/mL时谱图

    1.3.3结果计算

    按下式计算：

    式中x----样品中被测组分的残留量，单位为毫克每千克（g/kg）；

    c----待测溶液中磺胺组分的浓度，单位为毫克每毫升（mg/ml）；

    m----试样质量，单位为克（g）；

    v----最终样品定容体积，单位为毫升（ml）。

    2．实验结果与讨论

    2.1样品前处理：由于蜂蜜样品中含有一定量的蛋白、脂肪和纤维成分，处理不好将直接影响进样，对液相色谱柱损害较大，所以应将样品充分混匀之后，提取，净化，最后再经高速离心，可较好地去除纤维等杂质物质，得到进样溶液。

    2.2波长的选择[3-4］：通过对磺胺噻唑和磺胺二甲氧基嘧啶溶液进行210～400nm扫描,发现在245～270nm之间,吸收峰较强,本实验选择254nm作为方法的固定波长。

   2.3标准及样品：在本方法的实验条件下，磺胺噻唑及磺胺二甲氧嘧啶与杂质得到了很好的分离。

    2.4加标回收率：向5份样品中分别加入不同量的磺胺噻唑标准溶液，按本法处理、测定并计算回收率，结果见表2（表2见62页）：

    2.4 检出限：本方法检出限为0.10μg/ml。

    2.5优点：样品处理简单，不用衍生，省时省力；无需使用价格比较昂贵的荧光检测器，使用常见的紫外检测器即可，一般单位均能承受。

    3.结论

   实验表明，本方法所用乙酸铵流动相浓度低，样品进样量少，对分析柱的损害较小；样品加标回收率在88.00%～111.17%之间；线性系数R>0.9998；检出限磺胺噻唑为0.05μg/ml；磺胺二甲氧嘧啶为0.10μg/ml，能够满足一般食品等样品中磺胺类药物残留量的分析要求。另外，本方法具有简便快速、准确灵敏、成本低、可靠性强等优点，应用前景广泛。

    参考文献

    [1]  修丽华，王陆玲等.高效液相色谱法测定畜、禽肉中土霉素

    的残留量[J].现代食品科技，2007，Vol.23，No.10.

    [2] GB/T18932.5-2002，《蜂蜜中磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺

    甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、

    磺胺甲基异恶唑、磺胺二甲氧嘧啶残留量的测定方法　液

    相色谱法》[S]

    [3]  何华，倪坤仪.现代色谱分析[M]. 化学工业出版社，2000，

    228-245.

    [4]  阎吉昌. 环境分析[M]. 化学工业出版社，2002，308.

    （作者单位：吉林省长春市产品质量监督检验院）