[图文]快速测定鸭蛋中苏丹红Ⅳ号

编者按

   前不久，全国一些地区出现含苏丹红Ⅳ号鸭蛋被曝光后，各级质监部门积极应对，主动出击，严查相关食品质量，确保消费者安全。近日，本刊编辑部收到读者来函，希望了解禽蛋类苏丹红Ⅳ号的的测定方法。为此，我们特地编发广东省肇庆市质量计量监督检测所两位技术人员撰写的文章，以飨读者。

   近日，在河北出现含苏丹红Ⅳ号的鸭蛋以来，全国各地多个地区出现含苏丹红Ⅳ号的鸭蛋，苏丹红Ⅳ号是一种人工合成的偶氮类化工原料。苏丹红Ⅳ号与苏丹红1号相比，其颜色更鲜艳，毒性也更大，是三类致癌物。目前相关的检测方法是参照国家标准GB/T19681-2005的方法，该方法检测不仅时间长，且过程复杂需要用氧化铝层析柱分离。而氧化铝的质量不同以及层析柱的填装效果，对于苏丹红的提取均有影响。本文采用丙酮直接溶解样品，离心后取上清液经0.45um有机滤膜过滤上机，不仅时间短，操作简便，而且被检测组分损失小，回收率高。检测结果准确性高。

    1试验部分
    1.1试剂与标准品
    1.1.1乙腈   HPLC
    1.1.2丙酮   AR
    1.1.3甲酸   AR
    1.1.4标准物质：苏丹红Ⅳ号纯度大于95%
    1. 2标准溶液
   1.2.1标准贮备液：分别称取苏丹红Ⅳ100mg，用丙酮溶解定容至100ml此溶液的浓度为1mg/ml。
   1.2.2标准工作液：分别吸取上述贮备液10ml用丙酮定容至100ml，。再吸取上述贮备液10ml用丙酮定容至100ml，此溶液的浓度为10ug/ml。吸取上述0、0.5、1、2、4、5ml，用丙酮定容至50ml，此标准溶液系列的浓度为0、0.2、0.4、0.8、1.0ug/ml，绘制标准曲线。
    1.3仪器与设备
    1.3.1岛津高效液相色谱（配紫外检测器）
    1.3.2分析天平：精度为0.1mg
    1.3.3 离心机
    1.3.4 超声波水浴
    1.3.5  0.45um有机膜过滤头
    1.3.6  50ml具塞的比色管
    1.4样品的处理
    称取样品5～15克（准确至0.01g）于50ml具塞的比色管中用丙酮定容至50ml，在超声波中提取30分钟，离心分离后取上清液用0.45um有机膜过滤滤液备用。
    1.5仪器分析
    1.5.1检测器：紫外可见检测器520nm波长检测器
    1.5.2色谱柱VP-ODSC18柱4.5×150mm
    1.5.3流动相
    流动相A：15%的0.1%醋酸水
    流动相B：85%乙腈
    1.5.4流速：1.2ml/min
    1.5.5进样量：20ul
    1.5.6柱温：30℃
    2 结果计算：
    根椐保留时间定性，外标峰面积法定量。苏丹红Ⅳ号含量按式（1）计算：
    R=C×V/M---（1）
    R-样品中苏丹红Ⅳ号含量（mg/kg）
    C-试液中的丹红Ⅳ号的浓度（ug/ml）
    V-试液定容的体积；
    M-试样的质量(g)
    3 结果与讨论
    3．1溶剂的选择
   因丙酮化学性质较活泼，可溶于水、苏丹红、油脂、乙腈，故在样品处理和仪器分析中能较准确地进行测定。标准中使用正已烷或乙腈作为提取溶剂，在实际的操作中,丙酮对蛋黄的溶解很容易,可以将苏丹红Ⅳ号较完全地提取出来。
    3.2取样方式
   由于苏丹红Ⅳ是偶氮类物质，它的化学名称是邻甲苯偶氮-2-萘酚，并不溶解在鸭蛋的蛋白中，而只溶解在有较多油性成分的蛋黄中，这就是为什么只有蛋黄红而蛋白不红，所以为了保证食品的安全性，降低风险，取样只取蛋黄进行检测，更科学合理。
    3.3波长的选择
   通过对苏丹红的乙腈溶液进行200-800nm扫描，，发现在200～265nm和453～510nm之间它们均有吸收，在200～260nm之间，吸收峰较强，有带苯环的E1吸收带，为了防止样品溶剂和流动相的吸收峰可能产生的干扰，实验选择510nm作为方法的固定波长。
    3.4流动相的选择
   据文献报道在C18柱上酸性的乙腈水对于苏丹红Ⅳ的洗脱效果较好，我们试验了多种比例，最后发现0.1%醋酸水：乙腈=15：85，因只测定苏丹红Ⅳ采用1.2ml/min的固定流速,测定苏丹红,稳定性较好，约20分钟出峰.
    3.5回收率的试验
   称取样品中的蛋黄约10克，混合均匀后，加入不同浓度的苏丹红Ⅳ标液，按上述方法测定，实验结果如下表：