液分配高效液相色谱法测定饮料中合成色素

 合成色素以苯、甲苯、萘等化工产品为原料，经过磺化、硝化、卤化、偶氮化等一系列有机反应制成合成色素。合成色素有一定毒性，过多食用会危害人体健康。但由于合成色素成本低，色泽鲜艳，着色力强，色调多样，故被广泛使用。合成色素有严格的控制使用范围和最大使用量。因此食品中合成色素的准确测定具有重要意义。
   国标GB/T5009.35食品中合成色素的高效液相色谱法测定，此法色素提取有二法：一是聚酰胺吸附法，二是液-液分配法。对液-液分配法强调了只适用于含赤藓红的试样。但实践证明，聚酰胺吸附法操作繁琐，且有些天然色素不能洗除，使结果偏高；有些合成色素能被部分洗脱（赤藓红损失最大，约为44%），使结果偏低。本文提出的方法分析较快速、准确，重现性好，用于实际样品检测，结果满意。
    1．试验部分
    1.1仪器与试剂
    Vrian高效液相色谱仪，配备   Vrian210 输液泵，Vrian500 柱温箱，Vrian130紫外检测器，Vrian  色谱工作站。
    高效液相色谱专用甲醇。
    其他试剂均为分析纯，试验用水为去离子水。
    正辛胺正丁醇溶液：5%。
   合成色素标准使用液：用日落黄、柠檬黄等1.00mg/mL标准溶液，加水稀释20倍,经0.45μm滤膜过滤,配成50.0μg/mL的合成色素标准使用液。
    1.2试验方法
    1.2.1色谱条件
    色谱柱为VarianMicrosorb-MV100-5 C18(4.6mm×250mm,10μm).
    流动相：甲醇︰乙酸铵（0﹒02mol/L,PH=4）。
    梯度洗脱：甲醇︰20%～35% 3min；35%～98% 9min；98% 6min.
    紫外检测器：254nm
    流速：1ml/min.
    进样量：10μL。
    1.2.2定量方法
    移取合成色素使用液10μL进样分析，以峰面积外标法定量。
    1.2.3样品制备及分析步骤
   称取20.0g样品溶液放入分液漏斗中，加2mL盐酸、10mL三正辛胺正丁醇溶液（5%），振摇提取合成色素，重复提取至无色，约3～4次。合并提取的合成色素，用饱和硫酸钠溶液10mL洗2次.将提取的合成色素转移至另一分液漏斗中，加50mL正己烷混匀，加氨水提取3次，每次5mL,合并氨水层，加乙酸调成中性，水浴加热蒸发至近干，加水定溶至5mL。0.45μm过滤,取10μL进高效液相色谱仪。
    2．实验结果及结论
    2．1合成色素提取的关键
    试验证明正辛胺试剂的纯度影响提取效果。纯度高，提取合成色素彻底。
    2．2标准及样品
    在本方法的实验条件下，日落黄、柠檬黄与原料及杂质得到了很好的分离。
    2.3加标回收率
   向已知量的日落黄、柠檬黄饮料中加入一定量的日落黄、柠檬黄标准,按本法提取、测定并计算其回收率,结果见表1:
    表1：加标回收率试验结果(n＝5)
    Tab 1:  Resules of recovery test（见下表）
    2.4样品分析
    用杏饮料两个样品,分别按GB/T5009.35中聚酰胺吸附法和本文液-液分配方法进行样品处理,结果见表2:
    表2：两种方法测定结果比较(n＝6)（见61页表）