高效液相色谱法快速测定苏丹红Ⅰ的含量

   苏丹红是一种化学合成染料，具有致癌性，在食品中禁止使用。目前，测定苏丹红含量的方法有GB/T19681-2005国家推荐方法。该方法较为繁琐、费时，且样品处理不当，苏丹红则不能完全被提取，影响检测结果的准确性。本文用反相高效液相色谱——紫外可见光检测器进行色谱分析，采用外标法定量，测定以辣椒为主要或配料成分的植物油、辣酱等食品中违禁使用的苏丹红I，取得了满意的效果，方法回收率范围在98.1%至106%。同时，该方法检验成本低，是一种既简捷、经济，又能保证一定精度的测定方法，适合检验量大、人员少和时间要求较短的检验机构。
    1．实验部分
    1.1试剂与标准品
    1.1.1乙腈  HPLC
    1.1.2丙酮  AR
    1.1.3甲酸  AR
    1 1.4标准物质：苏丹红Ⅰ；纯度≥95%
    1.2标准溶液
   1.2.1标准贮备液：分别称取苏丹红Ⅰ100mg,用丙酮溶解定容至100ml。此溶液浓度为1mg/ml。
    1.2.2标准工作液：分别吸取上述贮备液10mL，用丙酮定容至100mL，此溶液浓度为100μg/mL。再吸取10mL100μg/mL的苏丹红溶液，用丙酮定容至100mL，此溶液浓度为10μg/mL。吸取此溶液0、0.5、1、2、4、5mL，用丙酮定容至50mL，此标准系列浓度为0、0.2、0.4、0.8、1.0μg/mL，绘制标准曲线。
    1.3 仪器与设备
    1.3.1  Agilent1100高效液相色谱仪（配有紫外可见光检测器）
    1.3.2  分析天平，精度为0.1mg
    1.3.3  离心机。
    1.3.4  超声波水浴锅。
    1.3.5  0.45μm有机相针式过滤头。
    1.3.6  50mL具塞比色管
    1.4 样品处理
   称取均匀的样品5～15克（准确至0.01g）于50mL具塞比色管中，用丙酮定容至50mL,在超声波水浴中超声提取30分钟。用一次性注射器抽取一定体积的样品，用0.45μm有机相针式过滤头过滤，滤液供测定用。
    1.5 仪器分析
    1.5.1 检测器：紫外-可见检测器， 478nm波长检测。
    1.5.2 色谱柱：phenomenex Luna 5μm C18(2) 250mm×4.6mm。
    1.5.3 流动相
    a) 溶剂A  10%乙酸溶液；
    b) 溶剂B 乙腈80%保持1min，80%～100%保持10min，100%保持5min。
    1.5.4 流速：1.0ml/min。
    1.5.5 进样量：20μl。
    1.5.6 柱温：25℃。
    2  结果计算
    根据保留时间定性，外标峰面积法定量。苏丹红含量按式（1）计算：
    R=C×V／m………………（1）
    R—样品中苏丹红含量（mg/kg）；
    C—试液中苏丹红的浓度（μg/ml）；
    V—试液定容体积（ml）；
    m—试样质量（g）。
    3  结果与讨论
    3.1溶剂的选择
   因丙酮化学性质较活泼，可溶于水、苏丹红、油脂、乙腈，故在样品处理和仪器分析中能较准确的进行测定。文献中使用正己烷或乙腈作为样品的提取溶剂，在实际操作中，这些溶剂无法将苏丹红从样品中完全提取，回收率只能达到60%～80%。 
    3.2 回收率试验
   称取10份色拉油样品约10克，加入不同体积的10μg/ml苏丹红Ⅰ丙酮标准溶液，按测定方法做回收率试验，实验数据见下表。
    3.3实验室之间的比对结果
   2005年,在参加长三角地区农产品食品检验能力比对试验活动中,作者用此方法进行苏丹红Ⅰ项目比对，参加的实验室共15家。作者提供的数据经统计，实验室间Z值为0.12，实验室内Z值为0.08，比对结论为满意。