鼠巴贝斯虫TaqMan探针荧光定量PCR方法的建立及应用

    陈倩1，王静1，侯咏2，富英群2，李明2，呼满霞3，杨军4，王旺1，郭天宇1，刘丽娟1

　　1.中国检验检疫科学研究院卫生检疫研究所，北京 100123；2.黑龙江出入境检验检疫局；3.绥芬河出入境检验检疫局；

　　4.逊克出入境检验检疫局

　　摘要：目的  建立一种用于检测鼠巴贝斯虫的TaqMan探针荧光定量PCR方法。方法 针对鼠巴贝斯虫18sRNA基因序列，设计特异性引物和探针，建立鼠巴贝斯虫的TaqMan探针荧光定量PCR反应体系，并对该方法的灵敏度和特异性进行验证。结果 本方法对鼠巴贝斯虫的检测灵敏度较高，最低检出限为1.34×10-7ng/μl；具有较高的特异性，与钩端螺旋体、莱姆病螺旋体、巴尔通体、Q热、土拉菌等病原均无交叉反应，反应体系稳定。结论 本研究建立的TaqMan探针荧光定量PCR方法特异、灵敏，可用于鼠巴贝斯虫的实验室快速检测及现场监测使用。

　　关键词：TaqMan荧光定量PCR；鼠巴贝斯虫；应用

　　中图分类号：R382.9  文献标识码：B

　　Development and application of a TaqMan real-time PCR method forthe detection of B.microti

　　CHEN Qian*， WANG Jing， HOU Yong， FU Ying-qun， LI Ming， HUMan-xia， YANG Jun， WANG Wang，

　　GUO Tian-yu， LIU Li-juan

　　*Institue of Health Quarantine， Chinese Academy of Inspection andQuarantine， Beijing， 100123， China

　　Abstract： Objective  To develop a TaqMan real-time PCRmethod to detect B.microti. Methods  Specific primers andprobes were designed according to the sequences of 18sRNA gene ofB.microti， to set up a TaqMan real-time PCR method to detectB.microti. The sensitivity and specificity were also analyzed.Results  The assay can detect B.microti with high specificityand the lowest detection limitation was 1.34×10-7ng/μl. Conclusion The assay， which is high sensitivity and specificity， can beused to detect B.microti in the laboratory.

　　Key words： TaqMan real-time PCR； B.microti； application

　　《中国国境卫生检疫杂志》2014年4期