人冠状病毒HCoV-HKU1环介导等温扩增检测技术的研究

    刘胜牙1，朱玉兰1，胡孔新2，谢聪贤1，甄胜西1，徐媛1

　　1.深圳国际旅行卫生保健中心，广东 深圳 518033；2.中国检验检疫科学研究院

　　摘要：目的  建立一种快速、灵敏、高效的人冠状病毒HKU1（HCoV-HKU1）LAMP扩增检测方法。方法 应用生物信息学软件设计5套LAMP扩增引物，以合成的HCoV-HKU1质粒为模板，通过实时浊度法进行最佳引物组的筛选，并分析该方法的特异性和灵敏度。结果 HCoV-HKU1LAMP扩增方法针对其他病原微生物及人类基因组无反应信号。该方法可以检测到1拷贝/?滋l的HCoV-HKU1质粒。结论 HCoV-HKU1 LAMP扩增方法特异性好、灵敏度高，在临床鉴别诊断和口岸冠状病毒的检测中具有很好的应用前景。

　　关键词：环介导等温扩增；人冠状病毒HKU1；检测；研究

　　中图分类号：R446.6  文献标识码：B

　　Study of loop-mediated isothermal amplification technique fordetection of HCoV-HKU1

　　LIU Sheng-ya*， ZHU Yu-lan， HU Kong-xin， XIE Cong-xian， ZHENSheng-xi， XU Yuan

　　*Shenzhen International Travel Healthcare Center， Shenzhen，Guangdong 518033， China

　　Abstract： Objective  To establish a rapid detection methodof human coronavirus HKU1 （HCoV-HKU1） based on loop-mediatedisothermal amplification （LAMP）. Methods  With the applicationof LAMP， five sets of LAMP primers were designed. The synthesizedHCoV-HKU1 gene was used as a template， and the optimal primers wereset by real-time turbidity method. Specificity and sensitivity ofthe method were assessed. Results  Other pathogenic organismsand human genome in the method have not shown any response signal.In the experiment of sensitivity，  HCoV-HKU1 plasmid gene hada detection limit of 1 copy/?滋l in each reaction. Conclusion This study indicates that our LAMP method is a rapid，sensitive， specific method to detect pathogen of HCoV-HKU1， and hasa good application prospect in clinical differential diagnosis andcoronavirus monitoring of port.

　　Key words： LAMP； HCoV-HKU1； Detection； Study

　　《中国国境卫生检疫杂志》2014年4期