原料乳与乳制品的三聚氰胺检测技术探讨

   液相色谱是原料乳与乳制品中三聚氰胺检测重要的初筛手段，实际工作中如果检测出来样品中含有高于检出限浓度的三聚氰胺，要用气质和液质进行确认，因为液相法有很多时候检出是假阳性。但作为基层检测机构，液相色谱仍然是经济、实用的方法。GB/T22388-2008《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》规定高效液相色谱法检测原料乳与乳制品中三聚氰胺为第一法。笔者就本实验室的条件对该方法进行了验证实验，并总结了检测中的操作技术要点。

    方法原理

   1．原理：试样用三氯乙酸溶液-乙腈提取，经阳离子交换固相萃取柱净化后，用高效液相色谱法测定，外标法定量。

   2．试剂与材料：甲醇、乙腈、氨水、三氯乙酸、柠檬酸、庚烷磺酸钠、三聚氰胺标准品、阳离子交换固相萃取柱、定性滤纸、海砂、微孔滤膜、氮气均按GB/T22388-2008规定。

   3．仪器和设备：P200Ⅱ型高效液相色谱仪-紫外检测器。离心机、超声波水浴、固相萃取装置、氮气吹干仪、具塞塑料离心管。

   4．样品处理：样品用三氯乙酸溶液提取、用阳离子交换固相萃取柱净化、吹氮气保护浓缩、定容。

   5．高效液相色谱测定：色谱参考条件：岛津C8柱250nm，用离子对试剂：乙腈（95：5）的流动相条件，岛津C18柱250nm，用离子对试剂：乙腈（90：10）的流动相条件。波长：240nm。柱温：40℃。

    技术要点

    1．样品提取

   1）样品溶解：实验中，固体样品如奶粉加三氯乙酸溶液直接超声，超声后奶粉有时并不能溶解。效果比较好的做法是称取奶粉样品2.0g置于50mL的离心管中，试剂分次加，先加10毫升的三氯乙酸溶液，震荡几下，使之溶解，后用5毫升三氯乙酸溶液和5毫升乙腈冲干净离心管壁，然后摇晃几下，混匀后待超声。

   2）超声、振荡、离心：为了提取的彻底，我们参考NY/T1372-2007标准，超声时间20分钟，然后振荡，这个步骤很重要，通过比较，仅超声不振荡提取效果差一些。水浴摇床对50毫升的离心管来说效果不太好，直接加盖后用手动振摇，注意时间要保证10分钟，效果比较好；或者把试样称取在25ml的容量瓶中提取，在水浴摇床上振摇10分钟，同时给予40℃的保温加热，提取效果也很好。

   实验证明离心转速越大离心的效果越好，我们使用9000～10000转的转速，离心5分钟。不同品种的样品，有些样品会存在离心后有脂肪组织漂在上面的现象。如果没有脂肪，可以把上清液不过滤直接定容至25毫升；如果有脂肪可采用先过滤后定容的方式比较好。

   2．净化过柱。一是每一批小柱都要先测试一次小柱的加标回收率，以确定小柱的性能是否达到使用要求。二是小柱在使用之前必须要活化，否则吸附不了要分析的物质。三是整个净化过程中不能让小柱干了，注意液体在接近干的时候就要加入下一种液体，小柱干了，柱床会产生裂缝，直接影响到加标回收率。四是净化过程要控制过柱的流速，因为流速过快导致该吸附的物质没有吸附完全而影响到加标回收率。最后当洗脱液滤干的时候，可以用负压抽一下，把小柱里没法通过重力流下来的洗脱液抽下来，确保收集完全。

   3．上机测定。洗脱液用氮气吹干，残留物用1ml的流动相定容，供高效液相色谱仪测定。用流动相将三聚氰胺标准品配置为标准规定的浓度系列，上机测得峰面积，以峰面积-浓度作图，得到回归方。同时测定待测样品。使用的液相色谱仪和色谱柱不同，出峰时间和分离效果也不相同。通常我们使用日本岛津公司的液相色谱仪，用岛津C8柱用离子对试剂：乙腈（95：5）的流动相条件，岛津C18柱用离子对试剂：乙腈（90：10）的流动相条件。在遇到干扰峰和三聚氰胺峰分不开、干扰峰和三聚氰胺峰重叠，或干扰峰的保留时间和标样保留时间基本一致，可以考虑适当调整流动相配比以达到干扰峰与三聚氰胺峰分离开的效果。按照上面的处理步骤，加标回收率在85%～106%左右，符合实验要求。

    （作者单位：内蒙古巴彦淖尔市产品质量计量检测所）《中国质量技术监督》