用高效液相色谱法测定食品中脱氢乙酸

   脱氢乙酸及其钠盐是食品中常用的防腐剂，具有良好的防腐效果。对霉菌和酵母抑制能力强，目前广泛用于食品加工行业，尤其是糕点、果汁和酱菜。试验表明，脱氢乙酸对人体健康有一定的影响，有可能导致肾结石等问题。

   GB/T5009.121-2003中介绍了用气相色谱法测定脱氧乙酸的测定方法。该方法在样品的前处理中，样品酸化后，用乙醚提取萃取结束后用无水硫酸钠脱水30分钟，样品浓缩后，用丙酮定容。其前处理、净化、分离过程复杂、繁琐、冗长，容易造成样品中测定成分损失，净化不彻底，且采用试剂毒性大等问题，从而影响测定的安全性和准确度。笔者参照各类文献资料根据脱氢乙酸在食品中的作用原理，将样品提取净化，用高效液相色谱法测其含量，经反复实践证明是切实可行的。

    1．测定方法

    1.1试剂

    除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682-2008规定的一级水。

    (1)甲醇色谱纯。

    (2)乙酸铵溶液：0.02mol／L。称取1.54g乙酸铵，用水溶解、定容至1L。

    （3）2%氢氧化钠溶液。

   （4）脱氢乙酸标准储备液：1mg/mL。准确称取100mg脱氢乙酸标准品，用2%的氢氧化钠溶解，用水定容至100mL，配成1mg/mL的标准储备液，4℃保存。

    1.2仪器

    高效液相色谱仪（带紫外检测器）。

    1.3分析步骤

    （1）样品处理

   准确称取混合的样品2.00克～5.00克，置于容量瓶中，加入水10毫升（视样品状况，若需沉淀蛋白可加入3毫升22%乙酸锌和10.6%亚铁氰化钾，震荡，充分沉淀蛋白），用NaoH溶液调PH值至7～8，加水至刻度，超声提取10分钟（视样品状况，若需脱脂，此时加入正己烷10毫升，重复两次脱脂）取适量至于离心管中，4000r/min离心10min，取清液经滤膜（0.45um）过滤，用高效液相色谱测定。

    （2）高效液相色谱仪参考条件

    a、色谱柱：C18 柱，5μm， 4.6mmх250mm或相当者。

    b、流动相：甲醇：0.02mol/L乙酸铵溶液（10：90）。

    c、流速：1ml／min。

    d、进样量：10μl。

    e、柱温：40℃。

    f、检测器：紫外检测器、293nm波长， 根据保留时间定性外标峰面积定量。

    （3）结果计算

    X=  A×V×1000

       M×V₁×1000

    X:样品中脱氢乙酸的含量g／kg。

    A:进样体积中脱氢乙酸的含量mg。

    V:样品稀释液总体积ml。

    V₁:进样体积ml。

    M: 样品质量g。

    2.结果与讨论

    按照以上测定方法对六组果汁进行加标回收实验见下表：

    加标回收率在90.00％～101.1％，平均回收率为95.3％。

   实验证明采用该方法测定食品中脱氢乙酸，样品前处理采用水萃取，沉淀蛋白等简单净化技术，且采用高效液相反相，整个实验操作相对简单且准确度高，效率高，此法切实可行。

    （作者单位：新疆昌吉州产品质量检验所）