CPA恒温扩增技术检测炭疽芽胞杆菌方法的建立

    赵婷婷1，孙文铮2，杨宇1, 王旺1，王静1

　　1.中国检验检疫科学研究院卫生检疫研究所，北京 100123；2.中国人民解放军总医院

　　摘要：目的  建立一种简便的新型交叉引物恒温核酸扩增结合层析试纸条方法，快速可视化检测炭疽芽胞杆菌核酸。方法 通过序列比对挑选出炭疽芽胞杆菌质粒上的特异性基因pXO2，设计引物、探针并合成标记，建立核酸恒温扩增反应体系，用金标免疫层析试纸条快速检测扩增产物，并测试方法的灵敏度和特异性。结果 建立的核酸恒温扩增结合金标条方法检测炭疽芽胞杆菌,采用阳性质粒DNA优化实验条件，灵敏度可达5.4pg/反应体系；建立的检测方法检测炭疽Sterne疫苗株的灵敏度为6×103CFU/ml；与枯草芽胞杆菌、苏云金芽胞杆菌、矮小芽胞杆菌、蜡样芽胞杆菌、 蕈状芽胞杆菌等相似菌株无交叉反应。结论 本研究建立的方法对炭疽芽胞杆菌检测具有很好的敏感性、特异性，为生物恐怖因子现场检测提供了新方法，在国境检疫及公共卫生安全领域有较好的应用前景。

　　关键词：炭疽芽胞杆菌；交叉引物（CPA）；恒温扩增技术；核酸试纸条检测方法

　　中图分类号：R517.2  文献标识码：B

　　CPA thermostatic expansion technique for detection

　　of Bacillus anthracis

　　ZHAO Ting-ting*， SUN Wen-zheng， YANG Yu， WANG Wang， WANGJing

　　*Institue of Health Quarantine, Chinese Academy of Inspection andQuarantine, Beijing 100123, China

　　Abstract：  Objective  To establish a simple and novelmethod named cross priming amplification combine to nucleic acidtest strip for rapid detection of Bacillus anthracis.  Methods The Bacillus anthracis specific primers and probes weredesigned by sequence alignments， then isothermal nucleic acidamplification reactions were established and the amplified productswere rapidly test by colloid gold immunochromatographic strip. Thesensitivity and specificity of this method was evaluated. Results  The method of cross priming amplificationcombine to nucleic acid test strip detected Bacillus anthracis wasoptimized by positive control standards plasmid with thesensitivity up to 10 pg /test， and sensitivity was 103 CFU/ml fordetection of Sterne strain， and no cross reaction was found todetect Bacillus subtilis， Bacillus thuringiensis， Bacillus pumilus，Bacillus cereus， Bacillus mycoides.  Conclusion  Withhigh sensitivity and specificity， this method will be useful fordetection of Bacillus anthracisin in the field of health quarantineand public health.

　　Key words：  Bacillus anthracis；Cross primingamplification；Thermostatic expansion technique；Nucleic acid teststrip

　　《中国国境卫生检疫杂志》2014年4期